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用普通琼脂糖代替低熔点胶回收DNA及在测序中的应用

时间:2016-04-21 07:49 浏览:


在DNA直接测序等分子生物实验中,需要有简便、高效的方法对通过PCR扩增的DNA进行分离回收。研究者所用的新方法是用国产普通琼脂糖代替进口低熔点胶直接回收DNA,并用回收的单、双链DNA直接测序,这是因为DNA的一级结构很稳定,加热至95℃2分钟使凝胶熔化不会使DNA断裂,不影响DNA测序。实验表明用这一方法分离回收的DNA中已完全去除了残余的DNA引物和非特异性DNA片段,回收效率达80%以上,回收的DNA片段直接用于测序效果很理想。单链、双链DNA直接测序均很稳定。尤其是用双链DNA模板直接测序的成功和稳定使用,使DNA直接测序技术有很大的改观。研究者采用普通琼脂糖比进口低熔点胶廉价10倍,且克服了低烙点胶成胶脆弱及高温环境不易成胶等缺点。方法简便、实用性好,经过对p53基因K-ras基因,B珠蛋白,基因PS-1基因,胰岛索基因等9种不同DNA片段的1385例次实验表明,用该种方法回收的DNA片段直接用于测序结果稳定,收集了较多有价值的资料。

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